在重组蛋白的表达和纯化过程中，通常采用添加融合标签（如MBP、His、GST）的方法，以提高目标蛋白的可溶性和促进其正确折叠。例如，MBP（麥芽糖结合蛋白）标签可以显著提高蛋白质的溶解性和稳定性，从而增加产量。

His（组氨酸）标签被广泛应用于重组蛋白的固定化金属亲和层析（IMAC）纯化。其优势在于标签分子量较小，几乎不影响重组蛋白的功能与应用，且具备较低的免疫原性。GST（谷胱甘肽S-转移酶）标签则能增强融合蛋白的可溶性，促进表达，并便于后续的纯化和实验操作。通过GST标签与固定化的谷胱甘肽的亲和作用，可以高效地从表达体系中分离和纯化融合蛋白，同时保持蛋白的生物活性和抗原性。

根据实际需求，有时需要去除融合标签。使用特定的蛋白酶精准、高效地去标签，对于获得结构和功能“原汁原味”的目标蛋白至关重要。常用的蛋白酶包括TEV蛋白酶（TEV Protease，目录号：PE004），它来源于烟草蚀纹病毒（Tobacco Etch Virus, TEV），具备极高的位点特异性。

与凝血酶、Factor Xa和肠激酶等蛋白酶相比，TEV酶对底物序列的识别更加精准，常用于从融合蛋白中去除标签，例如GST、MBP和His等。TEV酶能够特异性识别七肽序列：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓-Gly/Ser（ENLYFQ↓G/S），其专一性强，几乎无非特异性切割，能够保证蛋白的完整性。TEV酶在4–30°C的反应条件下表现出稳定的活性，适用于更广泛的系统。

通过大肠杆菌表达的目标蛋白，其纯度可达到99%；同时，带有His-tag的蛋白可以通过Ni-NTA轻松去除残余的酶。TEV切割反应的条件为：1×TEV反应缓冲液包含50mM Tris-HCl（pH 8.0），0.5mM EDTA，1mM DTT。在pH为5.5-8.5和温度为4℃-30℃的条件下，TEV酶均具备活性。一般推荐在4℃下进行过夜反应或在30℃下反应1小时，每个反应中添加15μg融合蛋白和适量TEV蛋白酶。反应后可通过15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。

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